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Acridine Orange属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料，AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测，AO与核酸结合方式主要有两种，一是插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；二是静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此AO嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光；Ethidium Bromide嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光；AO可透过活细胞膜，EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。

细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的；细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察，这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况，MTT法是测定线粒体中特有酶的活性，反映细胞数目的变化，其结果与细胞死亡的数目未必完全一致。

• 如有低温离心机进行离心效果更佳。
  
• 操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。
  
• EB Solution有一定毒性，请小心操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 收集细胞，用PBS清洗细胞1次，加入适量的PBS重悬细胞，计数并调节细胞浓度至(0.2~5)×10⁶/mL。
  
• 配制AO/EB工作液：取适量的试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，按照试剂(A)∶试剂(B)∶试剂(C)=1∶1∶8的比例稀配制成AO/EB工作液。
  
• 每25～50μL细胞悬液中加入AO/EB工作液2μL，混合均匀，室温孵育5～15min。
  
• 取洁净载玻片，滴加上5～10μL细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。
  
• 在荧光显微镜B域进行观察。